Стефания Казини родилась в городке Вилла-ди-Кьявенна 4 сентября 1948 года. Актёрским искусством заинтересовалась в раннем возрасте. Играла в школьном театре, вместе с другом, ныне актёром, Маурицио Никетти. По настоянию родителей поступила в Миланский технический университет, который окончила с дипломом архитектора и инженера. Во время учёбы не оставила увлечение театром. Так, накануне защиты диплома она тайно вылетела из Милана в Рим, где играла в постановке Джорджо Феррара, а утром вернулась обратно. Кроме того, параллельно с учёбой в университете, Стефания Казини обучалась в Школе драматического искусства. С ней занималась актриса Эсперия Сперани.

В 1970 году режиссёр Пьетро Джерми предложил Стефании главную роль в своём фильме «Каштаны хороши». Её партнёром по фильму был актёр Джанни Моранди. Снимаясь в кино, она продолжила играть в театре, сыграв вместе с Тино Буаццелли главную роль в постановке пьесы Луиджи Пиранделло «Шесть персонажей в поисках автора».

Значимой работой для Стефании Казини стала роль в фильме Бернардо Бертолуччи «Двадцатый век». Её партнёрами по картине были Роберт Де Ниро и Жерар Депардье. В одном из своих интервью, актриса вспоминала, что на съёмках Депардье был открытым, жизнерадостным, в то время, как Де Ниро, напротив, был очень замкнутым. Следующими ролями в кино, принесшими ей известность, стали работы в 1977 году в фильме «Суспирия» режиссёра Дарио Ардженто и в 1978 году в фильме «Прощай, самец» режиссёра Марко Феррери. В 1978 году, вместе с Витторио Сальвети, Беппе Грилло и Марией Джованной Эльми, Стефания Казини была ведущей музыкального фестиваля в Сан-Ремо.

В конце 1970-х она увлеклась журналистикой и начала сотрудничать с телекомпанией RAI. Создавала журналистские репортажи для телевизионной рубрики «Mixer». Прибыла в Нью-Йорк, где с Энди Уорхолом участвовала в создании фильма «Плохое от Энди Уорхола». В 1983 году, вместе с Франческой Марчиано, в качестве сценариста и режиссёра сняла свой первый телевизионный фильм «Где-то далеко» о жизни эмигрантов-итальянцев в США. В том же году эта картина была представлена на Венецианском кинофестивале. С 1990-х по 2008 год она сняла несколько документальных фильмов для телекомпании RAI. Документальные картины Стефании Казини посвящены, главным образом, женщинам, их положению в обществе в разных странах.

В начале 1980-х годов Стефания приняла решение решение не сниматься в кино, но пауза длилась недолго. Уже в конце 1980-х она снялась в нескольких телевизионных фильмах, а также сыграла в 1987 году в фильме «Живот архитектора» Питера Гринуэя и «Будь проклят тот день, когда я тебя встретил» Карло Вердоне. С 2000 по 2002 год Казини возглавляла кинофестиваль «Земля Сиены».

Стефания Казини является вице-президентом Ассоциации итальянских документалистов. С 1991 года актриса замужем за режиссёром Джанкарло Сольди. В 2015 году работала над документальным фильмом, посвящённым трагедии беженцев с севера Африки в Европе.